抽象性
目标.评估对伤口应用异源equine口服mecosamesenchymal电磁细胞的临床值和安全性动物类.8匹健康成年马无前肢皮肤损伤或骨骼疾病程程.stem细胞从捐精马口服粘膜中分离马受八大全重切伤口的生成,二对二对分叉前端和二对交错侧四种处理方法中各受一:不服药(T1),超声波酸(HA-gel含OM-MSC(T2),HA-gel含OM-MSC密室(T3)和HA-gel单存T4)定期进行粗宏评估和激光数字图片记录,以便包括伤口表面积在内的伤口评估全身皮肤抽取术在伤口感应前(D0正常皮肤)和完全伤口愈合后(D62修复皮肤)在每个网站都进行了全重皮肤抽查结果.所有伤口都治愈 D62无不良效果断肢伤口愈合慢于人体伤口OM-MSC及其密室对TH伤口收缩有正面影响OM-MSC对FL伤口收缩和缩写有正面影响遗留点前后没有重大差分在组织学检验中注意到结论和临床相关性.使用口服粘膜提取的马细胞是生产OM-MSC或它密室的可行技术由生物组件和HA组合生成的凝胶显示,在伤口愈合初级阶段应用时会产生积极效果
开工导 言
伤口愈合是一个动态过程 通过精心策划的细胞和分子事件交互过程 每当组织完整性断裂时开始第二,用意修复马脚常向复杂问题发展,包括慢性非愈合伤口和开发富饶颗粒组织一号..受创伤口愈合大都发生在肢体偏转上,往往成为慢性伤口,缺少上皮覆盖2..当前知识显示非愈合伤口或EGT开发有许多成因,包括减少动脉生成3,4持久分治生长因子导出纤维化响应5并不平衡collagen全息6..
马中,这种纤维化失序7失肢恢复不良、限制运动生涯和高价处理源
积聚证据表明干细胞理疗可促进伤口愈合8-10..流水电细胞显示免疫机能学、防炎性、补偿性再生性,表示可被用于各种发热或受伤组织中。证明MSC在动物模型中可减少毒炎并减少组织损伤11-13并产生有益的效果 修复鼠模型14-18号和马19号,20码..可以通过释放数种参数、酶和免疫细胞素[21号..除这些特性外,还显示有能力向外细胞环境释放多片含有多因子并产生治疗效果,这些因子大都表现在不同动物模型中22号,23号..细胞隐藏入外细胞空间的脂肪、核酸和蛋白质(生长因子、化学素、细胞素、粘合分子和预科)被称为密室
在这次研究中,我们评价了equine异形OM-MSC或OM-MSC密片应用对实验引导马脚分片外伤与HA、车辆处理和未经处理控制相比,这些处理安全并积极影响伤口愈合
二叉材料方法
2.1.动物类
这项研究根据法国动物道德委员会准则(APAFIS#5264-八头健康混合成年马(四头凝胶和四头马)不等年限(9至15岁不等),没有前肢瘸脚和任何疤痕或皮肤病,都包括在研究中。外科切除日(D0)和后十六天(D1-D16)马排入机箱小屋,然后在室外小板院内直到研究结束(D17-D90)。马每日吃10公斤干草2次并免费取水
2.2.学习设计
单中心研究是双盲随机测试一周确认期后,所有马都接受立体外科(D0),以诱导两个不同体址(TH和FL)四处皮肤伤口四天处理周期(D1至D4)后再评价周期直到D90百科全书对伤口使用百科全书,每匹马自控
2.3隔离文化OM-MSC
口服染色体细胞从两平方厘米组织切片分离出小切生物素消化法中含15mL二二240UI(Roche)300华府临床级MTFcollagenase二类(Invitrogen)补充aphericin华府g/ml、penicllin(100IU/ml)和gentamicin(50)华府g/ml)样本在37摄氏度消化2h30消化后,悬浮筛分,过滤器在400g室温度下离心10分钟生成细胞粒子取自二千分之alphaMEM培养介质2.介质在48h后变换低浓度amphericin华府g/ml)并继48小时修改至80%并发从头段获取的MSC用于Vivo实验OM-MSC的里程划分根据研发系统工具包建议(研发系统)验证
2.3.1流子OM-MSC
解析二百零二万个细胞/水井96-水板 编译为细胞测量缓冲电池在4摄氏度黑暗时浸泡20分钟并配有不同的流细胞抗体后再用PBS洗两次400g2分钟单元格悬停在PBS中以作进一步流细胞分析一号)抗体专用equineMSC标记:CD44、CD90、CD29、CD45和MHC二分析使用Beckman流细胞计处理数据KaluzaBeckman软件
2.3.2.准备HA-Gel
细胞用Trypsin采集,用PBS冲刷,并重新悬浮HA-Gel24h内管理HA(HTL生物技术,Mw=240kDa)溶入水中(2%最终富集度)并按250rpm和60°C调出12小时后与MSC混合总计500.103电池获取并用于HA-Gel编程,集中度为50.103细胞/cm3凝胶
2.4.声波生成
D0马用detomidine(0.01 mg/kkIV)和 butoraphan局部麻醉用近似侧形半环块获取blimbs和thorax上线块使用2%液化盐外科网站剪切并无休无止地准备共生成8 2.5x2.5cm全重皮肤伤口:2双侧形FL3和TH4cm间距2)模板使用规范创建受创区外科手术后未覆盖伤口以模拟田里自发创伤
2.5声波处理
Thorax和前端肢体所有伤口都提交应用四分之一处理选项(T1至T4)。前后两片区均有一个未处理(T1)以控制,一个伤口用OM-MSC嵌入HA-Gel(T2)处理,一个伤口用OM-MSC密室嵌入HA-Gel(T3)(StemCreamQET法兰西州StemT)处理,一个伤口单用HA-Gel(T4)处理单片记录中都包含由负责研究的临床医师盲目处理的、颜色不同(白红绿蓝)的伤口图处理器装温度控制冷柜直接从制造商运到里昂Equine研究中心,配有四色之一标签的消毒针头以这种方式保证模型双盲测试马随机划分为二组(G1和G2)。第一组两次接受四类处理48小时间隔(D1和D3),G2连续四天接受四次处理(D1、D2、D3和D4)。
2.6曲面布局
D1上所有thoracic伤口都装上非适配渗透套装并带内聚性绷带D2、D3和D4改换后D648h删除
在D1处理应用中,所有肢体伤口都装有非接合渗透套装加固无菌配棉纱布并装有内聚性绷带。D2、D3、D4换衣服,D16前每四天换一次马被安插在小户外板上,没有任何绷带。
2.7临床评价
检测不适时,在盒休息期(16天)和板套周期(74天)进行日常个人普通临床检查最后一次临床检验是在D90测试马研究期间没有接受任何其他药
2.8ound非入侵性评估
第一次处理应用24小时后手术D1和D3D5D7D11D15D19D23D28
毛视觉创伤评价包括评估伤口炎症、颗粒组织、粘结化、收缩和检测异常进化如感染从0到4生成并用于描述每个评价周期的伤口:分0:原创伤口大小2.5x2.5cm评分1:增加伤口大小并可见四端评分2:增加伤口尺寸,至少有一条伤口边缘覆盖颗粒组织评分3:减少伤口大小而不归并评分4:减少伤口大小并最小可见上分边界
数字图像使用激光数字声波文档设备(WI 54481,USA)获取每一伤口精确区测量向该设备提供四光束投射并略离伤口边界3)正确对齐激光束允许跟踪伤口周界4)摄像头连接计算机后,图像用专用软件处理,精确计算伤口环形和表面积在每个数字文档前 伤口外围温和净化 无菌盐水法 以更好地视觉化伤口边缘
2.9入侵性评测
取全重生物检测样本取自伤口生成过程(正常皮肤)和两个月后(D62修复伤口)。8毫米直径生物波击获取样本每一道伤口都收集到一中端和一中端生物感知片样本固定中缓冲10%准备历史检验后,四大类各分取0至4分:缩写度、粒子组织、炎细胞渗透和新孔化在所有评分中,0分配到缺少历史特征的部分,4分配到特征显赫时
2.10统计分析
统计分析用统计软件进行(R软件环境3.4.1版“单栅格”。评分统计按伤口类型处理:FL和TH伤口评价实验图由双向ANOVA执行,分解时间因子(9分点从D0到D28)和处理因子四大处理条件:控件(T1至T4)。分析期间验证评价因子间没有交互性估计每次处理效果时,通过调整线性模型分析伤口分数最后,频表分数由皮尔逊千方测试生成散列图和条形图用ggplot2图形定义执行24码..在所有生物假设中,统计测试拒绝无效假设被算入差差值小于0.05
3级结果
3.1.流子OM-MSC
纯MSC文化表现为面貌特征化、骨质分解和相位分解以及CFU-F编译
3.2临床评价
没有一个马在伤口生成后表现出不适或瘸脚所有伤口完全愈合 结束研究(D90)
3cm3ound非入侵性评估
毛愈合伤口变异生成后第一个月内观察到,此后未收集重大变异伤口生成后第三天(D3)基于数字摄影结果,大多数伤口总体环切度(53/64)小于D0原创尺寸D5至D7间发现43处伤口(43/64)体积增加
对TH而言,在D11(30/32)观测到受创面积最大减值,D23发现所有TH都完全愈合或受创面积小于0.4毫米2.
关于FL伤口,在D11并持续到D19(26/32)时仍观察到环形和表面积逐步增加D19后,所有FL伤口均显示下降,D60记录完全愈合
3.3.1声波缩放
伤口生成11天后(D11),发现TH伤口上没有粘结边界,但马面总体面积小得多,G1马两次用OM-MSC凝胶处理(T2)或OM-MSC隐形凝胶处理(T3)比T1和T4处理伤口处理G2连续四天四次处理中未记录此观察TH伤口双向ANOVA检测不到表面积演化和处理之间的重大差毛伤口评价评分由Fisher双向ANOVA评价(因素时间九分从0天到28天和因子处理四大条件T1、T2、T3和T4)。分析显示分数随时间大幅增加5(a),ANOVA )表示这些分数完全适配评估创痛前28天逐步愈合治疗TH伤口产生重要效果5(a)ANOVA系统 )线性模型分析显示控件(T1)和HA-gel(T4)没有重大差分 )并识别T2具有统计意义效果 )和T3 )对比T1T2和T3评分比控制评分高TH层次与不同处理方法之间的交叉频率用条形图和Pearson奇方测试调查,证实了处理对分数的重大影响(Figure5(b),X级平方测试 )T2和T3处理TH伤口显示3级评分增加与伤口收缩增加相对应
(a)
(b)
3.3.2.声波寄存
所有FL伤口先变小后缩小表面积,从D23开始Fisher双向ANOVA(因素时间从0到D28分九分,因子处理四大条件T1到T4分)评估FL和TH伤口评分评分分析显示治疗对FL伤口有重大影响6a),ANOVA )线性模型分析显示T1和T4之间没有显著差别 )或T1和T3间 )T2(OM-MSC)和T1(控制)大相径庭 )对FL伤口的T2效果在D10前比较清晰,从D15递归到研究结束理解OM-MSC效果涉及分数,Pearson奇方测试生成频表确认处理对分数有重大影响6(b),X级平方 )T2FL伤口显示分数3和4频率增加分数分别与伤口收缩增加有关
(a)
(b)
3.4.入侵性评测
与控件(T1)相比,单接受HA-Gel处理网站T4平均TH和FL伤分较高接收T3网站平均分数较低,接收T2网站平均分数最低TH网站平均分数比FL网站高,cranialTH网站比coudalTH网站分数略高
4级讨论
伤口现场比较显示,FL下降过程比TH耗时更长23天后,所有TH伤口几乎实现愈合过程,而FL伤口刚开始下降面积TH快速愈合过程与FL伤口对比(23天对60天)与前结果一致,显示distal收缩速度比四肢近似部分慢25码,26..大型伤口评分显示TH网站的伤口收缩程度更高(三分3分),解释为什么身体上的疤痕通常比马的四肢小
鉴于难处理五肢伤口,建议使用再生治疗法,作为一种有希望的新治疗法equine实践中MSC的治疗用法目前主要专用于处理肌肉骨骼失常,包括偏转性、悬浮和联合失序27号-29..本研究评估异源OM-MSC应用的临床价值和安全性
伤口生成11天后,光圈和表面积明显下降仅指HA-Gel处理的TH伤口,内含OM-MSC或其密室从这些观察中我们可以得出结论,这些再生医学处理方法在创伤愈合过程早期阶段使用时可产生有益的效果。这些结果还显示存在药用药的可能治疗窗口我们假设,在第一阶段愈合中,OM-MSC或其密室的存在会放大伤口愈合过程本假设与Textor假设相容20码观察COX-2表达式剧增时MSC生成一周后注入Equine伤口这些结果也与先前报告的数据一致,即需要用炎症信号割裂MSC产生治疗效果28码..
曲切作用和孔片作用可以解释MSC创伤愈合机制的动作机制细胞通过特征开发可塑性可起构件作用,可辨别一种细胞类型和另一种细胞类型,又称反切性[14..沿骨源化、二分制化、分解分解和线程分解能力基本得到证明30码,31号..人类、小鼠和马最近的报告还显示导出多功能干细胞可成功分解成树皮线32码并进直通细胞三十三..容积分解各种细胞类型的主要工具似乎是密室23号..参数介质效果之所以可能,是因为MSC显示丰富的密钥剖面图,通过接触煽动信号而增强内含能调节数细胞激活、迁移和扩散的因素29,34号..通过这些参数交互作用,MSC可规范collagen生产,增强皮肤再生,促进血管生成并增加伤口闭合率35码,36号..在这次研究中,描述TH伤口治疗的积极效果无法检测OM-MSC及其密室之间的临床差异试管局事实证明,密室通过激活煽动级联和刺激纤维爆破、心膜细胞元件和动脉上皮细胞扩散来增强愈合过程37号..据我们所知,马上没有研究评估修复过程的密室,也没有研究MSC和他们的石器因子间的比较研究
HA-Gel与OM-MSC和HA-Gel都基本相同,显示HA-Gel公司是OM-MSCs或历史学告诉我们皮肤在特定时间状态研究中它表示愈合过程结束正因如此,我们不能突出应用OM-MSC或Obsec
OM-MSC两次应用G1对伤口愈合产生有益效果,但在G2重复四次处理时没有观察到这种效果表示治疗或干扰伤口愈合早期阶段的绷带变化的潜在累积剂量效果(四天四轮换四轮换二轮换四轮换四轮换四轮换二轮换四轮换四轮换四轮换四轮换四轮换二轮换四轮换四轮换四轮换四轮换四轮换四轮换四轮换四轮换四轮换四轮换四轮换四轮换四轮换四轮换四轮换四轮换二轮假设累积处理会延迟愈合m-MSC或其孔片目标在修复伤口期间对炎性蛋白表达法进行进一步研究,以澄清作用机制
带状从D16所有FL清除,但所有伤口继续显示表面积逐步增加直至D19绑定可损及正常伤口愈合过程实验引导伤口愈合研究有意使用绷带制造慢愈合伤口和马假肢EGT38号..分层降低表氧张力并产生缺氧,再驱动动脉生成和纤维化并创建EGT留学20码伤口四肢无染以避免干扰愈合过程
口服mechymal电磁细胞和OM-MSC密片局部应用HA-Gel三十九..历史发现D62FL用HA-Gel处理的伤口最快速愈合显示单对HA伤口愈合有潜在正面效果Hyaluronice酸是一种自然聚合物,主要用于设计生物素材以传递干细胞显示多属性包括增强动脉生成、维护细胞生存和寄生机模型复位21号,40码..HA-Gel应用切伤前证明41号-43号正因如此 选择媒体管理OM-MSC使用fibrin-gel介质的另一项研究中未观察到迁移介质的这种正效果20码..
所有的TH伤口都愈合 无EGT或过量疤状相形之下,一些假肢伤口开发温和EGTeqids中描述得通一号..连续打包十六天后生成可能是EGT开发的一个主要因素TH包扎仅在伤口顶部应用六天从第一次处理应用开始寻找创伤愈合状态专用生物标志可能有助于处理马体缺陷过程,如开发EGT数个细胞事件以及与愈合伤口有关的调停者可起生物标志作用,如IL-1、IL-6和MMPs44号..然而,目前还没有开发出对齐有效因子故此本研究中未使用过
细胞很容易从各种自动机或异源组织中提取直系索和胎盘组织原创式在各种应用中显示一定效果,类似于传统源码,如从骨髓或脂肪组织分离的MSCs20码,45码-47..在这次研究中,异式OM-MSC或它的秘密室首次用于马匹中人医学研究口服粘膜和gingiva48号听口伤愈合速度快,伤疤质量优于皮肤伤49号,50码..口腔伤口通常是无疤状的,类似于胎儿伤口愈合人类病人创伤愈合和最终伤疤质量差异可能与MSC及其响应固有信号(obcrine)和外部信号能力差异相关51号,52上下文增长因子和变换增长因子辰族1大都插入外细胞矩阵沉降53号..MSC数项研究取自人类口交Mecosa和ngiva,应用到人类病人和动物中,显示伤口愈合得更好54号并产生免疫机能学和防炎效果55号..这一领域的研究需要与深入理解正常急性伤口修复、高度动态细胞信号级联和多阻扰性调停器行为事件相关56号,57号..扰动系统会导致异常化,如过度伤疤或失解愈合
5级结论
equine医学中,观察马口服Mecosa高度再生能力显示组织中存在强干细胞群48号..本研究证实了这一假设,OM-MSC及其密室显示对伤口愈合有积极影响更多工作需要引导理解最佳治疗窗口和最佳绷带协议优化这些创新处理方法但这些结果已经显示,在早期愈合阶段,装有OM-MSC或其密室的HA-Gel诱发TH伤口快速收缩特征,OM-MSC凝胶对FL伤口收缩和缩缩过程有刺激作用。
数据可用性
当前研究期间使用和/或分析的数据集可应合理请求从相关作者处获取
披露
StemT(Stem细胞产品)和GenBiotech法国Antibes(HA)都慷慨提供治疗这项工作是VetAgro Sup兽医学院研究教育集团高级作者就业的一部分。手稿曾作为招贴画提交ECVS年度科学会议https://www.ecvs.org/members/downloads/2021_LA_Proceedings.pdf.
利益冲突
保林卡农和图菲克卡德里是斯特姆特的员工生产干细胞产品,但没有参加临床研究其余作者声明他们没有利益冲突